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植物中的蘆薈苷的提取活性成分的常用方法
      
  聲明:本文分為上下2篇請您在看的時候為了保證完整性可以在本篇文章的頁尾點擊下一篇文章:蘆薈的有效成分多樣復雜,而且很多化學成分的性質是非常相近的,因此分離蘆薈中各種單體的技術還不成熟,現在應用的蘆薈產品大多數是蘆薈提取的混合物,如果能制備性分離蘆薈中的有效成分,應用于藥品和保健品中,特別對醫療行業將會是一個很有利的發展方向,因此,能夠建立一種提取分離蘆薈活性成分的方法和技術,在天然藥物研究中將會是一大進步。由于提取分離純化蘆薈苷的技術的限制,在對蘆薈苷功能性質方面的研究還比較缺乏,很多功效的研究都是基于對蒽醌類物質總功效的研究,而蘆薈苷是蒽醌類物質的代表,也是蘆薈蒽醌類物質的主要成分,所以把功效歸功于蘆薈苷,要驗證蘆薈苷的具體功效也需要對蘆薈苷進一步分離純化。本課題的核心即是尋找到高速有效分離純化蘆薈苷的方法。
  合物的提純得以大大簡化。由于吸附性和篩選性原理,有機化合物根據吸附力的不同及分子量的大小,吸附在大孔吸附樹脂上的化學成分經一定的溶劑洗脫而分開。大孔吸附樹脂孔徑、比表面積及構成類型被分為許多型號,在應用中,可根據實際要求及化合物特性加以選擇7。
  蘆薈主要含蒽醌類和多糖類等活性成分,目前對于大孔吸附樹脂對蘆薈有效成分進行富集純化的研究報道比較少,但其可行性已由張美玲論證8。而且實驗結果表明NKA-ⅡH和CAD45樹脂對蘆薈苷都有較好的吸附性能,對蘆薈有效成分的富集和純化是可行的,而且完全可以克服傳統加工方法存在的溶劑殘留、污染,產率低等問題,而且大孔吸附樹脂可以再生重復利用。但分離方法操作繁瑣,影響因素較多,分離純度較低,可考慮用于成分的粗分。
  張美玲針對大孔吸附樹脂對蘆薈苷分離純度低的問題提出采用大孔樹脂對蘆薈苷進行粗分離,后經硅膠柱層析(TLC法定性檢測蘆薈苷流出的位置)進一步純化得最終蘆薈苷成品,并用LC-GC或GC-MS聯用對種產品進行定性分析。硅膠為極性吸附劑,吸附力的大小取決于被分離物質的極性(極性越大,吸附力越強)和洗脫劑的極性(容劑極性越弱,硅膠對分離物質的吸附能力越強)。因此,用硅膠吸附色譜分離一組極性不同的混合物時,極性大的物質因吸附力大二洗脫慢;洗脫溶劑的極性增大,洗脫能力增強,洗脫速度加快。此法雖然能提高所得蘆薈苷的純度但操作更加繁瑣。
  高速逆流色譜法:高速逆流色譜法(highspeedcountercurrentchromato-graphy,HSCCC)是一種高效快速的液-液分配色譜新技術。因其不使用載體,避免了有效成分被色譜載體的不可逆吸附,且分離純化同步完成,有機溶劑消耗少。欲用HSCCC進行成功的分離,選擇適宜的溶劑系統非常重要。不同的溶劑系統,具有不同的上、下相之比(比重輕者為上相,重者為下相),其黏度、極性、密度等性質相差甚遠,對相同的成分具有不同的溶解、分配能力,形成分配系數的差異,對分離效果產生不同的影響。高速逆流色譜溶劑系統的選擇可以通過薄層層析的分配系數來確定。
  高速逆流色譜法:高速逆流色譜法(highspeedcountercurrentchromato-graphy,HSCCC)是一種高效快速的液-液分配色譜新技術。因其不使用載體,避免了有效成分被色譜載體的不可逆吸附,且分離純化同步完成,有機溶劑消耗少,是分離科學技術的一個新分支。該技術是一種不用固態吸附劑的全液態的色譜方法。由于不使用固態支撐體,與其它的色譜技術相比,HSCCC能夠完全消除支撐體導致的樣品不可逆吸附和對樣品的沾染、失活、變性等影響,實現復雜混合物中各組分的高純度分離。而用HSCCC進行成功的分離,選擇適宜的溶劑系統非常重要。不同的溶劑系統,具有不同的上、下相之比(比重輕者為上相,重者為下相),其黏度、極性、密度等性質相差甚遠,對相同的成分具有不同的溶解、分配能力,形成分配系數的差異,對分離效果產生不同的影響。高速逆流色譜溶劑系統的選擇可以通過薄層層析的分配系數來確定。
  高速逆流色譜法的特點:1、應用范圍廣,適應性好。由于溶劑系統的組成及配比可以是無限多的,因而從理論上講HSCCC可以適用于任何極性范圍內樣品的分離,在分離天然化合物方面具有其獨到之處。由于聚四氟乙烯管中的固定相為液體(不需要固相載體),因而可以消除固一液色譜中由于使用固相載體而帶來的吸附損失,特別適用于分離極性物質。2、操作簡便,容易掌握。儀器操作簡單,對樣品的預處理要求低,一般的粗提物即可進行HSCCC的制備分離或分析。3、回收率高。HSCCC不需要固相載體,消除了由于樣品在固相載體上的不可逆吸附和降解造成的損失,理論上樣品的回收率可達100%。在實驗中只要調整好分離條件,一般都有很高的回收率。4、重現性好,如果樣品不具有較強的表面活性作用,酸堿性也不強,即使多次進樣,其分離過程都保持很穩定,而且重現性相當好。5、分離效率高,分離量較大。由于其與一般的色譜分離方式不同,能實現梯度洗脫和反相洗脫,亦能進行重復進樣,使其特別適用于制備性分離,產品純度高,制備量大。下一頁:確定樣品中含有蘆薈苷成分TLC定性檢測
 
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